Biomarcadores de pronóstico en pacientes con cáncer de próstata localizado / Prognostic biomarkers in patients with localised prostate cancer

Resumen El tratamiento para cáncer de próstata localizado (prostatectomía radical o radioterapia) ofrece unas altas tasas de curación; sin embargo, del 20 al 30% de los casos desarrollan recurrencia bioquímica. Actualmente, existen factores clínicos y patológicos que ayudan a predecir recurrencia; no obstante tanto el carácter heterogéneo de estos tumores, las diferencias en los tiempos de progresión de cáncer localizado a metastásico como la resistencia al tratamiento han dado lugar a imprecisiones en la predicción del pronóstico y a tratamientos insuficientes o excesivos. Debido a esto se han estudiado biomarcadores con el fin de estratificar más acertadamente el riesgo y mejorar las decisiones de tratamiento de una manera adecuada y oportuna. Este manuscrito presenta una revisión de marcadores moleculares de pronóstico que se han propuesto en los pacientes con cáncer de próstata localizado, lo que podría permitir establecer con mayor precisión el riesgo de recurrencia de la enfermedad.

Abstract Treatment for localised prostate cancer (radical prostatectomy or radiotherapy), offers high cure rates; nevertheless, 20% to 30% of the cases develop biochemical recurrence. There are clinical and pathological features that are currently being used to predict recurrence of the disease. However, tumour heterogeneity in prostate cancer, along with differences in time of progression to metastasis and treatment resistance, have led to inaccuracies in predicting the risk of biochemical relapse, and therefore, misleading in treatment decisions. Because of this, many genetic markers have been studied in order to refine risk stratification and improve treatment decisions in a suitable and opportune manner. This paper presents a review of molecular prognostic markers that have been proposed in patients with localised prostate cancer, which potentially could allow establishing the risk of recurrence of the disease more accurately.

Variation in the number of EPIYA-C repeats in CagA protein from Colombian Helicobacter pylori strains and its ability to induce hummingbird phenotype in gastric epithelial cells / Variación en el número de repeticiones EPIYA-C en la proteína CagA de aislamientos colombianos de Helicobacter pylori y su capacidad para inducir fenotipo colibrí en células epiteliales gástricas

Introduction. Studies using Western Helicobacter pylori strains have shown that a risk factor for gastric cancer is the number of EPIYA-C motifs in the cytotoxin-associated A protein. CagA is delivered into epithelial cells, where it becomes tyrosine phosphorylated in their EPIYA repeats and induces cytoskeleton rearrangements. Objectives. The objective of this study was to evaluate H. pylori cagA positive strains isolated from Colombian patients with gastroduodenal diseases for the number of EPIYA-C repeats in cagA and their ability to induce cytoskeleton rearrangements in epithelial cells. Materials and methods. We analyzed the 3’ EPIYA repeats region of cagA by PCR in 93 H. pylori cagA positive strains from 49 patients with gastritis, 17 with gastric cancer, and 24 with duodenal ulcer. AGS cells exposed to the various H. pylori isolates were evaluated for rearrangements in their cytoskeleton. Results. Strains with one EPIYA-C were the most frequent in gastritis and duodenal ulcer patients. Strains with three EPIYA-C were mainly found in gastric cancer. We found a significantly higher risk of gastric cancer for individuals infected with strains harboring three EPIYA-C motifs (OR=12.4, CI95%: 2.32-66.3). Strains from gastric cancer showed significantly higher percentages of induction of cytoskeleton rearrangements in comparison with those from gastritis (p Mann-Whitney<0.005). Conclusions. H. pylori strains with three EPIYA-C repeats can confer an increased risk of cancer to infected individuals.

Introducción. En los aislamientos de Helicobacter pylori del hemisferio occidental, se ha observado que el número de repeticiones EPIYA-C en la proteína CagA es un factor de riesgo para cáncer gástrico. La proteína CagA es introducida en la célula epitelial y, posteriormente, es fosforilada en las tirosinas presentes en los motivos EPIYA e induce rearreglos en el citoesqueleto. Objetivos. Nuestro propósito fue evaluar el número de repeticiones EPIYA-C y la habilidad para inducir rearreglos en el citoesqueleto en los aislamientos de H. pylori positivos para cagA, provenientes de pacientes colombianos con enfermedad gastroduodenal. Materiales y métodos. Mediante PCR, se analizó la región 3´ que contiene las repeticiones EPIYA-C, en 93 aislamientos de H. pylori positivos para cagA provenientes de 49 pacientes con gastritis, 17 con cáncer gástrico y 24 con úlcera duodenal. Los rearreglos del citoesqueleto se evaluaron mediante cultivos simultáneos de células AGS con las cepas de H. pylori.Resultados. En gastritis y úlcera duodenal se observó la mayor frecuencia de aislamientos con EPIYA C; los aislamientos con tres repeticiones EPIYA-C se encontraron con mayor frecuencia en cáncer gástrico. Encontramos un riesgo de cáncer gástrico significativamente mayor para individuos infectados con cepas con tres repeticiones EPIYA-C (OR=12,4; IC95% 2,32-66,3). Los aislamientos provenientes de cáncer gástrico mostraron mayores porcentajes de inducción de rearreglos en el citoesqueleto que los observados con aislamientos provenientes de gastritis (prueba de Mann-Whitney menor de 0,005). Conclusiones. La infección con cepas de H. pylori con tres repeticiones EPIYA-C puede conferir un mayor riesgo de desarrollar cáncer gástrico.

Respuesta inmune humoral hacia los papilomavirus oncogénicos tipos 16, 31 y 58 en mujeres colombianas con citología normal / Humoral Immune Response to Oncogenic Papillomavirus Types 16, 31, and 58 among Colombian Women with Normal Cytology

Objetivo: Caracterizar la respuesta IgG e IgA hacia VLP (partículas semejantes a virus) del virus del papiloma humano (VPH) 16, 31 y 58 y determinar su asociación con la eliminación de la infección. Métodos: Se incluyeron 186 mujeres con citología normal participantes en un estudio de cohorte sobre la historia natural de la infección por VPH. Se evaluaron tres grupos: control (negativas para ADN VPH, n=146), eliminación (positivas al ingreso y negativas durante el seguimiento, n=25) y persistencia (positivas durante el seguimiento, n=15). Los anticuerpos IgG e IgA hacia VLP VPH 16, 31 y 58 se analizaron mediante ELISA. Resultados: En la primera visita, se observó en el grupo de eliminación una mayor seroprevalencia de anticuerpos IgG hacia VLP VPH 16. Esta prevalencia estuvo acompañada de mayores niveles de anticuerpos en este grupo, en comparación con los niveles observados en el grupo de persistencia (media DO405 nm 0,665 vs. 0,290, respectivamente). En contraste, en la quinta visita, se observó una mayor seroprevalencia de anticuerpos IgG hacia VLP VPH 16 y 58 en el grupo de persistencia (p=0,001 y p=0,003, respectivamente). Esta respuesta se correlacionó con mayores niveles de anticuerpos en esta visita (media DO405 nm 0,653 y 0,532, respectivamente), en comparación con los niveles de anticuerpos observados en la primera visita (media DO405 nm 0,290 y 0,362, respectivamente). Conclusiones: La presencia de altos niveles de anticuerpos IgG hacia VPH 16 y 58 durante la infección podría estar asociada con la eliminación de la infección.

Objective: To profile IgG and IgA response to the VLP ( virus-like particles) of the human papillomaviruses (HPV) 16, 31 and 58 and to assess the possibility that they may be related to eliminating infection. Methods: A group of 186 women with normal cytology, participants in a cohort study on the natural history of HPV infection, were selected. Three groups were evaluated: control (DNA HPV, n=146 negative), elimination (positive at outset and negative during follow-up, n=25), and persistance (positive during follow-up, n=15). The IgG and IgA antibodies against HPV-VLP 16, 31, and 58 were submitted to ELISA analysis. Results: During the initial visit greater IgG antibody seroprevalence against HPV16-VLP was observed among the elimination group. This prevalence was combined with greater antibody levels in this group in comparison with the levels found among members of the persistence (mean DO405 nm 0.665 vs. 0.290, respectively). In contrast, during the fifth visit, there was greater IgG antibody seroprevalence against HPV-PLV 16 and 58 among the persistance group (p=0.001 and p=0.003, respectively). This response correlated with greater anitbody levels on this visit (mean DO 405 nm 0.653 and 0.532, respectively) in comparison with the antibody levels observed on the first visit (mean DO 405 nm 0.290 and0.362, respectively). Conclusion: High levels of IgG antibodies working against HPV 16 and 58 during infection phase may be associated with elimination of infection.

Asociación de la expresión de IL-10 con la pérdida de respuesta específica th1 a VPH-16 E7 en pacientes con cáncer de cuello uterino / Association of expression of IL-10 with the loss of specific Th1 response to HPV-16 E7 in patients with cervical cancer

Objetivo: Examinar la asociación entre la respuesta celular anti-VPH y la expresión de HLA clase I, HLA-G e IL-10 en céluals tumorales. Materiales y métodos: Linfocitos fueron aislados de 18 pacientes con CCU y estimulados con células dendríticas pulsadas con la proteína E7VPH-16 o directamente con péptidos sintéticos: E751-70´E765-84yE779-98. La células fueron marcadas para CD4,CD69, citoquinas intracelulares IFN-y e IL-4 y analizadas por citometría. La expresión de HLA-G e IL-10 fue analizada por inmunohistoquimica. Resultados: Una pérdida total de la expresión de HLA clae I se observó en 11/18 y regulación negativamente en 4/18 pacientes. La expresión HLA-G se observó EN 11/18 y regulación negativamente en 4/18 pacientes mientras que la expresión IL-10 en 6/17 pacientes. Se observó una asociación inversa entre la expresión de IL-10 y la falta de una respuesta inmune especifica (p=0.041). Ninguna asociación fue observada entre la expresión de HLA clase I o la expresión de HLA-G con la respuesta inmune. Conclusiones: Nuestros resultados subrayan la importancia de otros factores inmunes, como la expresión de IL-10, que podrían influir en la respuesta antitumoral. Estos resultados pueden tener implicaciones importantes durante el desarrollo de nuevas estrategias inmunoterapéuticas.

Producción y purificación de la proteína Core del virus de la hepatitis C en el sistema de expresión del baculovirus para ensayos biológicos / Hepatitis C virus core protein production and purification in a baculovirus expression system for biological assays

Introducción. La infección por el virus de la hepatitis C (VHC) se caracteriza por la alta frecuencia de infección persistente. La capacidad del VHC para inducir alteraciones en la función de las células del sistema inmune, específicamente en las células dendríticas, parece ser una de las estrategias virales implicada en el establecimiento de la infección persistente. Esta estrategia parece estar mediada en gran parte por una de las proteínas estructurales codificada por el genoma del VHC, la proteína Core, unidad estructural de la cápside viral. Objetivo. Una de las limitantes para la evaluación de las propiedades de Core es la obtención y la purificación de la proteína nativa (191 aa). El objetivo de este estudio fue la producción y la purificación de la proteína Core completa en un sistema eucariote para evaluar las propiedades de la proteína en cultivos de células dendríticas humanas. Resultados. En este estudio se logró la producción de la proteína Core completa en el sistema de expresión de baculovirus y su purificación por la técnica de separación por punto isoeléctrico y electroelución. La pureza de la proteína obtenida se confirmó por Western blot y tinción con plata. Estos análisis mostraron dos bandas únicas correspondientes a las isoformas p23 y p21 de la proteína Core, previamente descritas en la literatura. Conclusiones. La proteína obtenida posee varias de las condiciones de la proteína Core nativa, como peso molecular, isoformas y localización subcelular. Los procedimientos descritos en este artículo son aplicables a proteínas asociadas a membranas producidas en sistemas de expresión eucarióticos

Respuesta serológica a las cápsides de los papilomavirus oncogénicos tipos 16, 18, 31, 33, 39, 58 y 59 en mujeres Colombianas con cáncer de cérvix / Serum response

Introducción: En Colombia, el carcinoma de cérvix es la primera causa de muerte por cáncer de la mujer en edad reproductiva.Se ha demostrado una asociación etiológica entre los virus del papiloma humano (HPV) de alto riesgo y esta neoplasia. La proteína L1 de los HPV tiene la propiedad de autoensamblarse en cápsides vacías(VLP). En varios estudios basados en VLP DE hpv16 o HPV18 se ha observado que la infección por HPV genitales es seguida por una respuesta serológica o proteínas de la cápside. Objetivos: Evaluar la respuesta serológica hacia las VLP de los tipos virales oncogénicos 16,18,31,33,39,58 y 59 en mujeres colombianas con cáncer de cérvix, y en controles y compararlos con la presencia de ADN viral, la edad y el curso clínico. Materiales y Métodos: Se analizó la presencia de anticuerpos hacia las VLP de 7 tipos virales oncogénicos en 147 sueros de mujeres con citología normal apareados por edad, mediante ELISA. Resultados: Se detectaron anticuerpos anti-VLP en 82 por ciento de pacientes y en 56 por ciento de controles. La detección de anticuerpos contra múltiples tipos de HPV fue la regla; en pacientes jóvenes con cáncer de cérvix se observaron altos nivels de anticuerpos. En los casos con seguimiento serológico durante un año, en general, los anticuerpos se mantuvieron en el mismo nivel; sin embargo, en algunos hubo elevación o disminución simultánea de los anticuerpos contra varios tipos virales. Conclusiones:Nuestros resultados confirman (i) la alta tasa de infecciones por HPV en Colombia, tanto en pacientes con cáncer como entre población general, y las particularmente altas tasas de infección por los tipos virales 31 y 58,(ii) la validez de los anticuerpos anti-VLP como marcadores de infecciones en curso o pasadas. La aparición o desaparición simultánea de anticuerpos contra VLP de varios tipos virales sugiere que los anticuerpos detectados en ELISA no son siempre tipoespecíficos.

DNA de HPV y anticuerpos hacia la proteína E7 de HPV16 como factores de Prónostico en mujeres con cáncer de cérvix sometidos a radioterapía / DNA and HPV and antibodies

Los efectos de la infección por HPV en la sensibilidad intrínseca de la célula tumoral a la radioterapí (RT) no son claros.Anticuerpos hacia la oncoproteína viral E7 son detectados de manera consistente en pacientes con cáncer de cérvix; .El Propósito de este estudio fue evaluar la presencia de DNA de HPV y anticuerpos hacia E7 del HPV16 como marcadores potenciales de pronóstico en carcinoma de cérvix.Se incluyeron 58 pacientes con diagnóstico de carcinoma cervical, estadios FIGO IIB y IIIB. Se tomaron muestras de sangre y cepillados cervicales antes de la RT 2 y 6-12 meses después. El DNA de HPV fue detectado por PCR, y los anticuerpos anti E7 fueron medidos por ELISA usando como blancos antigénicos una proteína recombinante de fusión MBP-E7 y dos péptidos sintéticos E7(a.a 1-20) y E7(a.a 66-85). El tiempo medio de seguimiento de las pacientes fue de 35 meses (rango: 2-65 meses). se hizo un análisis univariaado para determinar la significancia estadística de los factores relacionados con el pronóstico.Antes de la radioterapia se detectó DNA de HPV en un 18 por ciento de los casos. No se observaron asociaciones significativas entre el estado viral antes de RT y estadio FIGO, tamaño tumoral o tipo histológico.La presencia de HPV antes de RT y la eliminación del virus después RT se asociaron con un mejor pronóstico: la supervivencia global a 5 años fue del 65,9 por ciento para las pacientes positivas para HPV antes de RT versus el 36.3 por ciento para las pacientes negativas (p=0,038).Se observó una disminución estadísticamente significativa en la detección genérica de DNA de HPV después de la radioterapía. Después de la radioterapía. Después de tres meses 19 pacientes permanecieron poisitivos (p<10-4),después de 6-12 meses, 8 pacientes aún portaban DNA de HPV (p<10-4). La supervivencia global fue del 36 por ciento para pacientes con persistencia viral versus el 75 por ciento para las pacientes en las que el virus fue eliminado luego de la RT (p=0,002).Se detectaron anticuerpos hacia MBP-E7 en el 56,1 por ciento de pacientes, hacia E7(1-20 en el 26,3 por ciento y hacia E7(66-85) en el 31,6 por ciento.Los niveles de anticuerpos hacia la proteína E7 de HPV16 y la detección de HPV antes del tratameinto y en el seguimiento podrían tener una utilidad clínica en el manejo diferencial de las pacientes con carcinoma de cuello uterino localmente avanzado, con miras a una mayor sobrevida.